HIV實驗室生物安全管理手冊10頁.doc
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2024-12-17
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1、生物安全手冊目錄目錄1第一部分 基本規范2進入規定2人員防護3實驗室工作區3生物安全管理4第二部分 實驗室技術4移液管和移液輔助器的使用5生物安全柜的使用5血清的分離6離心機的使用6冰箱與冰柜的維護和使用7裝有凍干物質安瓿的開啟8第三部分 消毒和滅菌8一、定義8二、化學殺菌劑9氯(次氯酸鈉)10乙醇10碘和碘伏11三、清除局部環境的污染12四、洗手清除手部污染12五、高壓滅菌12高壓滅菌參數12高壓滅菌器的裝載13高壓滅菌器使用注意事項13附錄114設備的安全性14表A1-1 可能產生危害的儀器設備及其操作14表A1-2 儀器設備相關事故的原因8表A1-3 生物安全設備9表A1-4 個體防護裝2、備10第一部分 基本規范 根據感染性微生物的相對危害程度(危險度2級,病原體能夠對人致病,但對實驗室工作人員或環境不易導致嚴重危害),本實驗室為基礎實驗室,屬于二級生物安全水平。進入規定1、在實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志(圖1)。2、只有經批準的人員方可進入實驗室工作區域。3、實驗室的門應保持關閉。4、兒童不應被批準或允許進入實驗室工作區域。5、與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。人員防護1、在HIV實驗室工作時,任何時候都必須穿著工作服。2、在進行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料的操作時,應戴上合適的手套。手套用完后,應先消毒再摘除,隨后必須洗手。33、在處理完感染性實驗材料后,以及在離開實驗室工作區域前,都必須洗手。4、為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害,必須戴安全眼鏡、面罩(面具)或其他防護設備。5、嚴禁穿著實驗室工作服離開實驗室,(如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛生間)。6、不得在實驗室內穿露腳趾的鞋子。7、禁止在實驗室工作區域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。8、禁止在實驗室工作區域儲存食品和飲料。9、在實驗室內用過的工作服不得和日常服裝放在同一柜子內。實驗室工作區1、實驗室應保持清潔整齊,嚴禁擺放和實驗無關的物品。2、發生具有潛在危害性的材料溢出以及在每天工作結束之后,都必須清除工作臺面4、的污染。3、所有受到污染的材料、標本和培養物在廢棄或清潔再利用之前,必須清除污染。4、在進行包裝和運輸時必須遵循國家和或國際的相關規定。5、如果窗戶可以打開,則應安裝防止節肢動物進入的紗窗。 生物安全管理1、實驗室主任(對實驗室直接負責的人員)負責制訂和采用生物安全管理計劃以及安全或操作手冊。2、實驗室主管(向實驗室主任匯報)應當保證提供常規的實驗室安全培訓。3、要將生物安全實驗室的特殊危害告知實驗室人員,同時要求他們閱讀生物安全或操作手冊,并遵循標準的操作和規程。實驗室主管應當確保所有實驗室人員都了解這些要求。實驗室內應備有可供取閱的安全或操作手冊。4、應當制訂節肢動物和嚙齒動物的控制方案。5、5、如有必要,應為所有實驗室人員提供適宜的醫學評估、監測和治療,并應妥善保存相應的醫學記錄。第二部分 實驗室技術實驗室傷害以及與工作有關的感染主要是由于人為失誤不良實驗技術以及儀器使用不當造成的。本部分概要介紹了避免或盡量減少這類常見問題的技術和方法。移液管和移液輔助器的使用1、應用移液輔助器,嚴禁用口吸取。2、所有移液管應帶有棉塞以減少移液器具的污染。3、不能向含有感染性物質的溶液中吹入氣體。4、感染性物質不能使用移液管反復吹吸混合。5、不能將液體從移液管內用力吹出。6、污染的移液管應完全浸入適當的消毒液中,并在消毒液中浸泡適當時間后再進行處理。7、盛放廢棄移液管的容器應當放在生物安全柜內。6、8、為了避免感染性物質從移液管中滴出而擴散,在工作臺面應當放置一塊吸有消毒液的紙,使用后將其按感染性廢棄物處理。生物安全柜的使用1、生物安全柜運行正常時才能使用。2、生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。3、安全柜內應盡量少放置器材或標本,不能影響后部壓力排風系統的氣流循環。4、所有工作必須在工作臺面的中后部進行,并能夠通過玻璃觀察擋板看到。5、盡量減少操作者身后的人員活動。6、操作者不應反復移出和伸進手臂以免干擾氣流。7、不要使實驗記錄本移液管以及其他物品阻擋空氣格柵,因為這將干擾氣體流動,引起物品的潛在污染和操作者的暴露。8、工作完成后以及每天下班前,應使用70%的酒精對生物安全柜的臺面7、進行擦拭,但切忌用酒精擦拭玻璃擋板。9、在安全柜內的工作開始前和結束后,安全柜的風機應至少運行5min。10、在生物安全柜內操作時,不能進行文字工作。血清的分離1、只有經過嚴格培訓的人員才能進行這項工作。2、操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。3、血液和血清應當小心吸取,而不能傾倒。嚴禁用口吸液。4、移液管使用后應完全浸入適當的消毒液中,并在消毒液中浸泡適當的時間,然后再丟棄或滅菌清洗后重復使用。5、帶有血凝塊等的廢棄標本管,在加蓋后應當放在適當的防漏容器內高壓滅菌。離心機的使用1、應按照操作手冊來操作離心機。2、離心管在使用前應檢查是否破損。3、用于離心的離心管應當始終牢固蓋緊。4、離心8、桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內進行。5、離心桶和十字軸應按重量配對,并在裝載離心管后正確平衡。6、操作指南中應給出液面距離心管管口需要留出的空間大小。7、空離心桶應當用蒸餾水來平衡。8、每次使用后,要清除離心桶、轉子和離心機腔的污染。9、使用后應當將離心桶倒置存放使平衡液流干。10、應當每天檢查離心機內轉子部位的腔壁是否被污染或弄臟,如污染明顯,應重新評估離心操作規范。冰箱與冰柜的維護和使用1、冰箱、低溫冰箱和干冰柜應當定期除霜和清潔,應清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應戴厚橡膠手套并進行面部防護,清理后要對內表面進行消毒。2、儲存在冰箱內的所有容器應當清楚地9、標明內裝物品的科學名稱、儲存日期和儲存者的姓名。未標明的或廢舊物品應當高壓滅菌并丟棄。3、應當保存一份凍存物品的清單。4、除非有防爆措施,否則冰箱內不能放置易燃溶液。冰箱門上應注明這一點。裝有凍干物質安瓿的開啟1、首先清除安瓿外表面的污染。2、如果管內有棉花或纖維塞,可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡。3、用一團酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手,然后手持安瓿從標記的銼痕處打開。4、將頂部小心移去并按污染材料處理。5、如果塞子仍然在安瓿上,用消毒鑷子除去。6、緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物,避免出現泡沫。第三部分 消毒和滅菌一、定義關于消毒和滅菌有許多不同的術語,下面是生物安全中較常10、用的:抗菌劑(antimicrobial) 能夠殺死微生物或抑制它們生長和繁殖的制劑。防腐劑(antiseptic) 能夠抑制微生物生長和繁殖但不足將其殺滅的物質。防腐劑經常應用于體表。生物殺滅劑(biocide) 所有能夠殺死生物體的制劑的統稱。化學殺菌劑(chemicalgermcide)用于殺死微生物的化學品或化學混合物。清除污染(decontamination)去除和或殺死微生物的任何過程。該詞也用于去除或中和有危害的化學品和放射性物質。消毒劑(disinfectant) 用于殺死微生物的化學品或化學混合物,但不一定殺死其孢子。消毒劑常用于非生命物體或其表面。消毒(disinfecti11、on) 殺死微生物的物理或化學手段,但不一定殺死其孢子。滅菌劑(microbicide) 能夠殺死微生物的化學品或化學混合物。該詞常常可以代替“生物殺滅劑”、“化學殺菌劑”或“抗菌劑”。殺孢子劑(sporocide) 用于殺死微生物和孢子的化學品或化學混合物。滅菌 (sterilization) 殺死和或去除所有微生物及其孢子的過程。二、化學殺菌劑許多殺菌劑對人或環境有害,應當按生產商的說明小心地進行選擇、貯存、操作、使用和廢棄。為了個人的安全,建議在稀釋化學殺菌劑時應戴手套、圍裙和保護眼睛的器具。下面介紹一些常規使用的化學殺菌劑,并列出它們的一般用途和安全特征。除非另外標注,殺菌劑的濃度用重12、量體積(w/v)來表示。表3-1匯總了含氯消毒劑的推薦使用濃度。表1 含氯消毒劑的推薦使用濃度“清潔”情況下a“污染”情況下b所需的有效氯濃度0.1%(1 g/L)0.5%(5 g/L)次氯酸鈉溶液(含有5的有效氯)20 mL/L100 mL/L次氯酸鈣(含有70的有效氯)1.4 g/L7.0 g/L二氯異氰尿酸鈉粉劑(含60的有效氯)1.7 g/L8.5 g/L二氯異氰尿酸鈉片劑(每片含1.5 g 有效氯)每升1 片每升4 片氯胺(含有25的有效氯)c20 g/L20 g/La 去除大部分污染材料后b 溢流情況(如血液)或大量污染材料沒有除去時c 參見正文氯(次氯酸鈉)1、氯屬于快速作用的氧13、化劑,是一種可廣泛應用的廣譜化學殺菌劑。它一般以次氯酸鈉(NaOCl)溶液來作為漂白劑銷售。但氯的許多副產物可能對人體及環境有害,應該避免濫用含氯消毒劑,特別是漂白劑。2、常規實驗室消毒劑的有效氯濃度為1 g/L。處理生物危害性物質的溢出以及含有大量有機物的情況時用含有5 g/L 有效氯的更強作用的溶液。家用漂白劑的次氯酸鈉溶液含有50 g/L 的有效氯,工業用漂白劑的次氯酸鈉溶液含有近120 g/L 的有效氯,因此必須進行相應的稀釋來達到工作濃度。3、次氯酸鈣Ca(ClO)2的顆粒或片劑一般含有70%的有效氯。用顆粒或片劑配制濃度1.4 g/L 或7.0 g/L 的溶液,其有效氯濃度分別為114、 g/L 和5 g/L。4、不建議將漂白劑當作防腐劑使用,但可以用作普通目的的消毒劑以及用于浸泡非金屬類的污染材料。在緊急情況下也可以用終濃度含12 mg/L 有效氯的漂白劑來消毒飲用水。5、氯氣具有強毒性。因此漂白劑只能在通風良好的地方儲存和使用。6、漂白劑不能與酸混合以避免氯氣快速釋放。乙醇1、乙醇(C2H5OH)對于繁殖的細菌、真菌和含脂病毒具有活性,但不能滅活孢子,而對非含脂病毒的作用則不確定。2、其水溶液最有效的使用濃度約為70(v/v);更高或更低的濃度均不適宜殺菌。3、醇類溶液的主要優點是處理后物品不會留下任何殘留物。4、將乙醇與其他試劑混合使用比單獨使用更有效,如70(v/v)15、乙醇和100 g/L 的甲醛混合使用,以及使用含有2 g/L 有效氯的乙醇。5、70%(v/v)乙醇溶液可以用于消毒皮膚、實驗臺和生物安全柜的工作臺面,以及浸泡小的外科手術器械。6、由于乙醇可以使皮膚干燥,所以經常與潤滑劑混合使用。7、在不便于或不可能進行徹底洗手的情況下,推薦使用含乙醇的擦手液對輕度污染的手進行消毒。但是必須記住,乙醇對孢子無效,而且不能殺死所有類型的非含脂類病毒。8、乙醇是易揮發和易燃的,不能在明火附近使用。9、其工作液應儲存在適當的容器內以避免醇類揮發。10、乙醇可以硬化橡膠并溶解某些膠質。11、為了避免乙醇用于其他非滅菌目的,在實驗室里對乙醇進行專門的清點和儲存是非常重16、要的。12、含有乙醇溶液的瓶子必須清楚標記以避免被意外高壓滅菌。碘和碘伏1、這類消毒劑的作用與氯類似,只是有機質對它們的抑制作用略弱。2、碘可以使纖維和環境表面著色,一般不適合作為消毒劑。但是,碘伏和碘酊是很好的抗菌劑。3、多聚碘(polyvidone iodine)是一種安全可靠的外科手術擦手劑和手術前皮膚抗菌劑。4、碘類抗菌劑一般不適于醫療牙醫器械的消毒。5、碘不能在鋁或銅上使用。6、碘有毒性。含有有機碘的產品必須于410儲存,以避免有潛在危害性的細菌在里面生長。三、清除局部環境的污染清除表面污染時使用次氯酸鈉(NaOCl)溶液;含有1有效氯的溶液適于普通的環境衛生設備,但是當處理高危環境17、時,建議使用高濃度(5 g/L)溶液。用于清除環境污染時,含有3過氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品。四、洗手清除手部污染1、實驗室人員需要經常地、徹底地洗手。2、處理完生物危害性材料后以及離開實驗室前均必須洗手。3、大多數情況下,用普通的肥皂和水徹底沖洗對于清除手部污染就足夠了。但在高度危險的情況下,建議使用殺菌肥皂。手要完全抹上肥皂,搓洗至少10 秒鐘,用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干。4、應使用紙巾或毛巾來關上水龍頭,以防止再度污染洗凈的手。5、如果沒有條件徹底洗手或洗手不方便,應該用酒精擦手來清除雙手的輕度污染。五、高壓滅菌高壓滅菌的濕熱法是最常用、最為有效的清除病原體污染的物18、理手段。滅菌后的物品必須小心操作并保存,以保證在使用之前不再被污染。高壓滅菌參數對于大多數目的,下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果:1、134、3min2、126、10min3、121、30min4、115、45min高壓滅菌器的裝載為了利于蒸汽的滲透和空氣排出,高壓滅菌物品應松散包裝放置在滅菌器內。要使蒸汽能夠作用到其內容物。高壓滅菌器使用注意事項1、應由受過良好培訓的人員負責高壓滅菌器的操作和日常維護。2、由有資質人員定期檢查滅菌器柜腔、門的密封性以及所有的儀表和控制器。3、應使用飽和蒸汽,并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學品,這些物質可能污染正在滅菌的物品。4、所有要高壓滅菌19、的物品都應放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中;滅菌器柜腔裝載要松散,以便蒸汽可以均勻作用于裝載物。5、當滅菌器內部加壓時,互鎖安全裝置可以防止門被打開,而沒有互鎖裝置的高壓滅菌器,應當關閉主蒸汽閥并待溫度下降到80以下時再打開門。6、當高壓滅菌液體時,由于取出液體時可能因過熱而沸騰,故應采用慢排式設置。7、即使溫度下降到80以下,操作者打開門時也應當戴適當的手套和面罩來進行防護。8、在進行高壓滅菌效果的常規監測中,生物指示劑或熱電偶計應置于每件高壓滅菌物品的中心。最好在“最大”裝載時用熱偶計和記錄儀進行定時監測,以確定滅菌程序是否恰當。9、應當注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物20、品中的紙等堵塞。附錄1設備的安全性儀器設備在使用時,有些操作可能造成微生物學危害,而另外一些操作或處理則是專門設計用來避免或減少生物學危害的。表A1-1 可能產生危害的儀器設備及其操作儀器危害如何消除或減少危害皮下注射針頭 意外接種、產生氣溶膠或有害物質溢出 不要重新給針頭戴護套或截斷針頭。 使用針頭鎖定型注射器以避免針頭和注射器的分離,或使用針頭和注射器為一體的一次性注射器。 采用規范的實驗室技術,例如:注射器抽液時要小心,盡可能減少形成氣泡和接種物泡沫。避免用注射器來混合感染性液體;否則,要確保針頭的尖端伸入到容器中液面之下,并避免用力過大。從有橡皮塞的瓶子中取下針頭之前,應用經適當消毒劑21、浸濕的脫脂棉來包裹針頭和塞子。豎直向上將注射器中過量的液體和氣泡排到經適當消毒劑浸濕的脫脂棉或裝有棉花的小瓶中。 操作感染性物質時均應在生物安全柜中進行。 使用后要進行高壓滅菌并確保進行了妥善處理。如果使用的是一次性針頭和注射器,只有在高壓滅菌后才能拆卸。 使用可封閉性的容器(安全杯)或密封轉子。在氣溶膠沉降后(30min)再打開容器或轉子,或在生物安全柜中操作。離心機產生氣溶膠、噴濺及離心管破裂 在離心機和真空泵之間安裝HEPA 過濾器。振蕩器產生氣溶膠、泄漏和容器破裂 在打開勻漿器以前先等候30min 以使氣溶膠沉積。冷卻以使氣溶膠凝聚。表A1-2 儀器設備相關事故的原因事故事故原因減少或22、消除危害設計或建造有缺陷培養箱有電火花電擊沒有溫度過高斷路裝置沒有提供可靠的接地 符合國家標準不適當使用離心事故轉軸上的離心桶吊籃沒有平衡 培訓和監督工作人員厭氧培養箱爆炸不正確使用氣體 培訓和監督工作人員不正確配用家用型冰箱爆炸危險性化學品沒有儲存在防火防爆容器中,如用滲漏的螺旋瓶蓋儲存乙醚。 低閃點溶劑和提取物僅貯存在具有火花爆炸保護裝置的冰箱或安全柜中。表A1-3 生物安全設備設備避免的危害安全性特征生物安全柜級氣溶膠和噴濺 盡量減小工作入口處向內的氣流(正面氣流速度);排風經充分過濾 不能保護操作對象級氣溶膠和噴濺 盡量減小工作窗口處向內的氣流(正面氣流速度);排風經充分過濾 可以保護23、操作對象級氣溶膠和噴濺 最高防護 如果內部為層流氣流,則可以保護操作對象移液輔助器由于口吸產生的危害,例如病原體的食入、吸入用口抽吸吸管時所生成的氣溶膠、從吸管中吹出或滴出液體、吸管吸入端的污染等 便于使用 控制吸管吸入端的污染,保護移液輔助器、操作者和真空管道 可以滅菌 控制吸管尖端的泄漏微型接種環加熱器、一次性接種環移動接種環時造成的噴濺 遮護玻璃管或陶瓷管的開口端,采用氣體或電加熱 一次性的,不需加熱設 施 內 用 于收集并運送感染性物質進行滅菌的防漏容器產生氣溶膠、溢出和泄漏 有罩或蓋子的防漏結構 耐用 耐高壓滅菌盛放銳器的一次性容器意外刺傷 耐高壓滅菌 堅固,不易刺破實驗室和單位間運送物品的容器微生物泄漏 堅固 能盛放溢出物的防水性一級和二級容器 用于吸收溢出物的材料手動或自動的高壓滅菌器感染性物質(以保證丟棄或重復使用時的安全) 經批準的設計 有效的加熱滅菌螺口蓋的瓶子產生氣溶膠和泄漏 有效的防護表A1-4 個體防護裝備裝備避免的危害安全性特征實驗服、隔離衣、連體衣污染衣服 背面開口 罩在日常服裝外鞋襪碰撞和噴濺 不露腳趾護目鏡碰撞和噴濺 防碰撞鏡片(必須有視力校正或外戴視力校正眼鏡) 側面有護罩N95口罩碰撞和噴濺 罩住面部 發生意外時易于取下手套直接接觸微生物劃破 得到微生物學認可的一次性乳膠、乙烯樹脂或聚腈類材料 保護手 網孔結構