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1、臨床病毒學檢測標本采集、保存、運輸制度臨床檢測標本包括：體液、血液、分泌物、排泄物及組織等。能否發現一未知病原，在很大程度上取決于是否能正確、及時收集標本。標本采集、運輸和保存的各環節都至關重要，對于檢測結果的準確性及有效性影響極大。在常規檢測中這些樣本可能產生病毒顆粒氣溶膠而造成交叉感染，為了防止檢驗人員的交叉感染，醫學實驗室安全管理及標本的采集、運送、檢測和處理的安全性是十分重要的環節。一、標本的容器運輸容器、消毒標本容器、運輸媒體、特殊測試的采集和運輸的整套工具要嚴格要求。只有用合適的容器采集和運輸的標本才能用于測試。標本容器必須認真加固以防泄漏。超過保質期的容器也不能用于采集和運輸。必2、須在潔凈的環境中培養。放在適當傾斜的瓊脂或運輸媒體上。用旋緊的試管，不要側旋。病毒分離接種標本必須冷藏。不能使用瓊脂培養基和混合培養。把傾斜管或病毒放在能密封的塑料袋中。按要求來放置和運輸以上物品。根據原始容器的尺寸來選擇傳染性標本運輸容器。二、貼標簽未經合適標明的傳染性疾病標本不能用于檢測。標本必須寫上病人的名字和一個惟一的識別號碼。如果使用獨立的分類標簽，標簽要貼緊以防在運輸過程中遺失。在貼標簽的過程中不能影響標本的染色。每個切片都要貼上標簽（僅在放切片的容器上貼標簽是不行的），并且必須貼在接種標本切片的同一側面。三、檢測申請單傳染病標本必須具有一個測試申請單或電子申請單。必須注明標本的來3、源。對于標本的處理來說患者的資料，采集的時間和地點，臨床病史，癥狀和診斷，抗生素的療程，和任何可能的微生物記錄。如果一種微生物送去鑒定，可能含有的其他微生物也必須指出。四、運輸運輸的時候單純追求速度是不對的。迅速處理使病原體的生活能力的損失降到最低，并保證菌叢有足夠的數量用于精確鑒定。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日五、檢驗報告一旦得到精確數據就可得到初步結果。最終結果一般在培養完成的時候得到。如果需要的話，只要一出現任何陽性，顯著的染色或培養（如：血液，CSF，無菌的體液）就可把初步結果告知醫生或實驗室。電話通知的請求必須寫在檢測申請單或寫在電子申請單的注腳上。必須有患者或4、實驗室的名字以及電話號碼。結果或關于結果的說明可以在工作時間從實驗室獲得。有報告價值的疾病、潛在的可能的疾病注明在最終報告上，判斷報告的可信度及正確性則是具體操作的實驗室和主治醫生的責任。六、臨床標本采集的基本原則供分離病毒、檢出核酸及抗原的標本，要求做到：1早特別是對用于病毒分離、抗原或核酸檢測的標本。2快病毒離活體后在室溫下很易死亡，故采得標本應盡快送檢。不能及時檢測的標本應放放裝有冰塊或干冰的容器內送檢。短時間可低溫保存，凍存的標本忌反復凍融。3近用于病毒分離、抗原或核酸檢測的標本應盡量取自病變部位或接近病變部位（如腦炎取腦脊液，腹瀉取糞便，呼吸道感染取鼻咽分泌物或支氣管灌洗液，有病毒血5、癥時采取血液）。4多標本的量不能太少，如有可能一次取多種標本，在病程急性期和恢復期都取標本。5凈避免污染標本，特別是用于病毒分離或PCR檢測的標本。七、傳染病標本采集的具體方法采集合適的標本進行培養是探索傳染病的致病微生物的關鍵步驟。一次失敗的標本采集可能會導致致病微生物分離的失敗，并會增加一系列對受污染的微生物的處理。標本采集的基本概念：1在合適的位置進行采集，避免受附近的組織或分泌物的污染。2在最佳時間采集，血液標本應采集急性期和恢復期雙份血清測定抗體滴度。3采集的量要充分。4使用合適的采集工具。消毒的、防漏的標本容器。使用合適的運輸媒體（M4用于病毒和Chlamydia培養）。5只要有可6、能就要在使用抗生素和抗病毒藥物之前采集標本。6恰當標記標本并填寫檢測申請單。寫明標本來源。7盡量縮短運輸時間。在采集標本到送到實驗室這段時間內要維持一個合適的環境。8用7095的乙醇和12的碘酒清潔皮膚表面。消毒作用能維持的最大時間為2min。以下是標本采集的具體說明：撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日【血液】 （病毒或分子測試）1清潔皮膚表面用于血液培養。2在5ml的EDTA真空采血管（lavender top）中采集血液。只有在必須的時候才使用兒科型號的試管（大約3ml）。不要用兒科試管采集成人和大于2歲的兒童的標本。3采集后把試管翻轉幾次。4采集后除去皮膚表面的碘酒。5此7、時進行血沉的準備。6直接運輸全血標本。不要冷藏或試圖從全血標本中提取血沉棕黃層。【體液】無菌（除尿液，腦脊液）。1皮膚表面處理。2使用消毒的針頭和注射器采集液體。3取10ml用于分析。剩余標本在封口的注射器中運輸。如果有氧菌和無氧菌并存，則使用無氧運輸的瓶子，保證厭氧微生物的存活。10ml腹膜液可放在血液培養瓶中。腹膜液是惟一可以放在血液培養瓶中的體液。需病毒分離則把3ml或更少的體液放在病毒運輸媒體或無菌瓶中。病毒標本在28下直接送檢。【骨髓】1醫生在采集的時候必須穿手術衣，戴面罩，戴手套。2皮膚表面處理。3用無菌紗布皺起周圍的皮膚。4用無菌針頭和注射器經皮抽取骨髓。5在含有SPS的無菌管中8、放35ml標本。病毒培養和分子測試需要EDTA。6在一般環境下運輸標本。【水皰，皰疹】1清潔皮膚表面用于血液培養。2用無菌的針頭和注射器吸取液體和（或）膿液。3取樣后，置于合適的病毒或細菌運輸媒介中。4如果沒有液體，則打開水皰或皰疹，用棉球擦傷口來采集細胞。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日【腦脊液】1采集標本時醫生必須穿手術衣，戴面罩、手套。因為要使用一個開口的試管，其他人必須戴面罩或遠離，避免呼吸污染。2在皮膚上自中間向周圍擦12碘酒，然后擦7090乙醇溶液。3在穿刺的部位用無菌的紗布使皮膚皺起來。4插入針頭。把標本注入3支無菌的防漏的試管中。按以下要求采集適當體積：細菌培9、養1ml。真菌培養810ml。分子測試1ml。分枝桿菌培養810ml。病毒培養2ml。5將試管嚴密封口。為了減少培養皮膚表面菌叢的可能，使用了第3支試管。將標本冷凍用于分子測試。病毒培養時，如果體積大于3ml則馬上冷藏和運輸。如果體積小于3ml，則用M4病毒運輸媒介在28下運輸。【宮頸】（宮頸內）細胞的培養。1患者按截石術的位置放好。2準備內鏡的時候盡量用溫水不用潤滑劑。3插入內鏡并顯示宮頸口。4用棉球除去多余的黏液。5將一個達可綸棉球伸入宮頸口，輕輕地旋轉，保持1030s。6拿出棉球放在運輸媒介中。7在室溫下運輸，病毒培養則在28下運輸。【宮頸】（宮頸內）細胞的HPV檢測。1使用一個ARUP10、公司產的Digene陰道取樣管。這套工具包括一個陰道刷和一個用于HPV檢測的試管。2孕婦不要使用陰道刷。3在獲得DNA測試標本以前先采集Pap點狀標本。在陰道鏡用乙酸和碘酒處理以前先采集DNA標本。4用棉球或達可綸球除去宮頸口內外多余的黏液。丟棄棉球。5把陰道刷插入宮頸內口11.5cm直至陰道刷龐大部分的剛毛接觸到宮頸外口。沿順時針方向旋轉3周。不要把陰道刷全部插入宮頸。6取出刷子。不要使剛毛接觸試管外壁或其他物體。7把刷子插入試管底部。在畫線處折斷，把試管旋緊。8在28下運輸。9宮頸活檢：新鮮的宮頸組織縱長大于5mm的話必須直接放在Digene標本運輸媒介中并冷凍。10液基標本也可采集和運輸11、。【陰道分泌物】陰道分泌物培養常常不能產生有意義的結果。在所有陰道分泌物可用核酸檢測試驗進行檢測。可參閱宮頸取樣。【子宮內膜】1使患者位于截石術的位置。2插入內鏡顯示宮頸口。3把一個窄內徑的導管放在子宮口。4通過導管插入一個棉簽采集子宮內膜標本。這種方法避免了接觸子宮黏膜，減少了感染的可能。5把棉簽放在運輸媒介中，用于病毒培養則在28下運輸。【皮膚】1用7095乙醇溶液清潔皮膚。2在活動傷口的邊緣用解剖刀采集表皮碎屑。3把標本放在一個干的無菌容器中。4在室溫下送檢。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日【耳】1外耳的培養和處理輕微外傷的方法一樣。2中耳液的采集和采集無菌體液一樣。如12、果診斷為中耳疾病，則從硬化鼓膜處取中耳液。【眼】1用溫和的消毒劑清潔眼周皮膚。2化膿性結膜炎：用棉簽采集膿液；把棉簽放在運輸媒介中在室溫下送檢或在28下進行病毒培養。3角膜感染用上述方法擦拭結膜；采集多樣的角膜碎屑直接放在病毒運輸媒介中；室溫下運輸或在28下用于病毒培養。4眼內液體：用外科針頭吸取液體；用于細菌培養在室溫下運輸，病毒培養在28下，分子測試則需冷凍。【鼻咽吸出物和（或）沖洗液】1對吸出液來說，將黏液trap系在抽吸泵和導管上，將包裝材料留在抽吸管上。打開抽吸管調整到指示的壓力。2如果沒有專用抽吸泵，將導管插入鼻腔中，向后上方延伸打開外耳道。注意：達到后咽所插入的深度等于從前鼻孔到13、外耳道的距離。3應用抽吸泵。旋轉式移動，慢慢地退出導管。4病毒培養在28轉運或分子實驗要冷凍。5對于沖洗液來說，抽吸35ml消毒生理鹽水放到一個新的生理鹽水中。6將球形管插入一側鼻孔知道鼻孔被阻塞。7擠壓球形管向一側鼻孔慢慢地灌輸生理鹽水，迅速松開球莖收集可回收的鼻腔標本。8將球形瓶中的液體倒空到一個合適的干燥消過毒的標本容器中，或加3ml或加更少瓶中液體到病毒轉運載體中（M4）。9在28轉運。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日【鼻咽擦拭】1患者取合適坐位，將頭向后揚起。2插入擴鼻器。3從擴鼻器中插入一個棉簽（用一根和伸縮的金屬絲）到鼻咽部。4緩慢旋轉棉簽停留2030s。5移出14、棉簽，放入一個不生長的轉運基中（例如原始擦拭標本移出的培養基）。將擦拭標本放入M4載體中用來做病毒培養。6在室溫下或28轉運做病毒培養。（1）注意：因為棉簽尖端很細而且容易干燥所以要用轉運載體。可能出現的微生物有很復雜的營養要求。對于兒童來說，可以用特制的球形抽吸泵操作。（2）注釋：用一個常規棉簽收集前鼻孔的培養標本。對于兒童，用一個鼻咽棉簽方便收集標本；室溫下轉運。 【咽喉】1用一個棉的，滌綸的或藻酸鈣的藥簽。2用一個壓舌板和一個明亮的光源，以保證有一個清晰的視野。3到達腭垂之后并擦拭：扁桃體；后咽；潰瘍處，分泌物，傷口或發炎部位。4將藥簽放入轉移媒介中并在常溫下轉移或在28下做病毒培養。【15、前列腺】1用肥皂和水清洗陰莖頭部。2通過直腸按摩獲取前列腺液。3用一個消毒棉簽采集液體。4在室溫下轉運。5作為選擇，在信息之前或之后立即獲取尿標本用來培養。【唾液】l確保患者合作采集充分的標本。ARUP將決定充足標本所需的鱗狀上皮數目。2按以下幾點指示患者：用流水漱口以去除食物殘渣；讓患者深呼吸然后多咳幾次以采集深部標本；患者將痰液吐到干燥、消毒的容器中。3如果患者無痰，用生理鹽水噴霧誘導產生。考慮輔助呼吸治療。4迅速在室溫下轉運標本。如果預計會延遲1h轉運則冷藏標本；要是做分子實驗則冷凍標本。【痰液】1確保患者合作以采集到合適的標本。ARUP公司確定鱗狀上皮細胞是合適的標本。2給患者指示如下16、：漱口去除食物殘渣；使患者深呼吸并咳嗽數次以得到深層標本；患者必須把痰咳在干燥無菌的容器中。3如果患者不能自行咳出痰液，則用噴霧的方法誘導。參考呼吸輔助治療。4在室溫下直接送檢。如果可能延誤1h以上，則冷藏。如用于分子測試則需冷凍。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日【大便】1將采集的標本放在一個干凈的有底淺盒子里或放在馬桶座和便池之間的塑料包里。不要使尿液或洗手間的水污染大便。2將標本放在一個干凈的、干燥的容器里或放在適當的防腐劑中。3常溫下在2h之內將標本轉移，或28進行試管培養。注：如果大便標本無法獲得，以下是做培養時合適的替代方法：擦拭直腸中的黏液物；將直腸擦拭藥簽插入肛17、門里2.54cm（1英寸）（如果做輪狀病毒/腺病毒EIA時不能用該法）。【組織】1組織的采集是一個不具有傷害性的操作并且需要一個訓練有素的內科醫生做手術采集。2在無菌條件下采集組織。采集的組織包括損傷部位的中央和邊緣部位。3將標本放在一個無菌的容器里，容器應放在用消毒的無菌鹽水浸泡的無菌紗布上。4立即在常溫下將標本轉移，轉移時要保證厭氧微生物的恢復。如果做病毒學培養，則不要使組織干燥，使組織在28的病毒轉移介質（M4）中懸浮，做分子檢測時要冷凍轉移。5不要將組織放在甲醛溶液里。【尿液】1女性患者采集尿液說明移去內衣；用肥皂和水洗手，沖手，然后用一次性紙巾擦干雙手或者甩去多余水分；用一只手將陰唇18、展開使之連續保持分開狀態；另一只手拿著開口的消毒杯，注意手不要接觸杯子或杯蓋的邊緣及內面；收集不同時段尿液（前段、中段、后段），接尿時不要中途停止。杯子不要接觸腿、外陰或衣服；將蓋子蓋住杯子。2男性患者采集尿液的說明洗手；完全收回陰莖前部的皮膚；收集不同時段尿液（前段、中段、后段），接尿時不要中途停止。杯子不要接觸陰莖；將蓋子蓋住杯子。3核酸擴增試驗第一段小便的采集患者在前2h里必排過尿；用一個干凈的空塑料杯采集前2025ml的尿液；將蓋子蓋住杯子；將放在特殊檢測轉移中介里的冷藏尿液轉移。4恥骨上吸取尿液這并非是常規方式，最好由有經驗的人操作。方法的操作可在相關文獻中找到；這些標本可做厭氧菌培19、養，如果需要做厭氧菌培養時，需要在厭氧環境中送檢。5留置尿管取尿不要從導尿包中取尿，因為導尿管外部的細菌可能在該部位生長；用乙醇墊擦干凈導尿管；用一個消毒針和注射器在管上打一個孔。直接從管中抽取尿液；將尿液轉移到一個消毒標本容器中；不要用導尿管頭培養。6標本處理立即在標本上做標簽，并在采集后10min內冷藏于28環境里。【傷口】1傷口，可參閱大水皰，液皰。2對開放傷口：清潔傷口表面的開放竇管盡量去除表面的微生物菌叢，不要用殺菌藥物；盡量培養傷口底部和邊緣以避免采集的是正常菌叢微生物；以下是竇管首選的標本；a用針或導管插入術獲得的吸入物質；b沿竇管線刮下的物質。只有以上方法不可行時，才可采用從竇20、管上擦洗下的標本。竇管的擦洗可能不能準確反映潛在的疾病；不要送檢表淺傷口的細菌培養做厭氧菌培養。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日八、病毒轉移媒介（M4）一些標本送檢時不需用轉移媒介，因為可期望這些病毒有一定的繁殖能力。這一類的標本包括無菌的體液，如腦脊髓液、胸水、送檢的置于EDTA的血液、尿液以及其他一些非無菌的標本，如鼻咽洗液，痰液，肺泡灌洗液和大便。只要對其穩定性有疑問時，標本就應放置于合適的轉移中介里，如Microtest M4。1組織和活檢組織可直接放在病毒轉移中介里。這些組織的直徑不要大于12cm。2膿腫組織，大水皰，膿皰，液皰，傷口和皮膚被刮削下的碎屑能用藥簽采集21、，直接放在病毒轉移中介里。如果這些組織已經吸取，則放不超過3ml（等于轉移中介量）的組織于M4。3腦脊液可放在一個消毒容器里送檢或加入M4管，但不超過3ml。4尿液可放在一個消毒容器里送檢或加入M4管，但不超過3ml。5肺泡灌洗液，鼻咽洗液，痰液和別的一些無菌體液可放在一個消毒容器里送檢或加入M4管，但不超過3ml。6大便可放在一個消毒容器里送檢或放在M4管里，標本如一個胡桃大小。7血液可放在一個EATA管里送檢。不要吸取血層棕黃層。病毒轉移中介（M4）的規格與其他液體病毒轉移中介（如從Bartels，Syva等獲得的標有Viral/Chlamydia轉移物的轉移中介）一樣。用藻酸鈣和木材制作22、的擦拭藥簽可以對一些病毒的恢復有干擾。這些也可能是PCR抑制物，因此不適于用在這類檢測中。可用滅菌的塑料柄的聚酯纖維人造絲織物拭子。九、標本保存1取樣后的標本，越早檢驗，分離病原體的效果越好。鏡檢應在采樣當時制片（干燥、固定和染色）。做細菌分離培養的樣本密封后常溫下2h內送檢。不能及時檢驗或檢驗周期較長的標本應低溫保存，并及時送檢。2供一般檢驗的樣品，在8以下保存，使用結實密封加冰的廣口保溫瓶裝運即可。3供分離病毒的樣品，在標本采集后盡快接種，否則應立即70冷凍保存，溫度越低保存時間越長，可用化學制冷劑或置液氮瓶中保存。常用的樣品運輸液為：pH7.47.6的Hanks，EagleS或水解乳蛋白23、液。或使用廠家提供的病毒轉移媒介。為防止細菌和真菌生長，在采樣液中需加入青霉素、鏈霉素，終濃度為每毫升1 000U青霉素和100g的鏈霉素，（也可用慶大霉素，其終濃度為每毫升1mg，）同時加制霉菌素，終濃度為每毫升4g。分離病毒的組織可放于50甘油磷酸鹽緩沖液中，在5條件下保存數周。用于組織或細胞內病毒抗原檢測的標本應固定后再冷藏保存。污染標本，如鼻咽分泌液、糞便等應加入青霉素、鏈霉素或慶大霉素等，以免雜菌污染細胞或雞胚，而影響病毒分離。4無條件開展監測的單位，應在冷藏條件下24h內將標本送到相關實驗室，否則冷凍保存，l周內送檢。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日（一） 包裝124、標本應放在已滅菌的帶螺旋蓋（有密封墊圈）的塑料管（A）中。2直接在標本管（A）上用油性記號筆寫明樣品種類、姓名、編號、采樣時間。3將密閉后的標本管放入大小適合的塑料袋（B）內密封，每袋裝一份標本。4將標本的有關信息填在“病毒標本送檢登記表”，連同標本管（B）一起密封在另一塑料袋（C）內。5管和送檢表的塑料袋（C）放入另一個密封、耐受一定壓力容器（D）中，內填吸水和具緩沖能力的材料，外面印有生物危險標記。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個塑料袋內再次做密封后放入容器（D）內。6將裝有標本管和送檢表的容器（D）放入專用運輸箱（E）內，放入冰排，并用柔軟物質填充，關緊箱蓋。 7液體的包裝。主25、要容器應該是防漏的，且容量不得超過500ml。在主要容器和第二層內包裝之間應放置能吸收液體的物質；如果幾個易碎的主要容器放在同一個第二層包裝內，它們要單獨包裹或有隔離層，以防止它們互相碰撞。主要容器或第二層包裝應經受內壓產生的至少為95 kPa（0.95 bar）壓差而不漏。外包裝容量不得大于4L。8固體的包裝。主要容器應該是防散落的，且容量不得超過500g。如果幾個易碎的主要容器放在同一個第二層包裝內，它們要單獨包裹或有隔離層，以防止它們互相碰撞，并且應有防漏的第二層包裝。外包裝容量不得大于4kg。空運完整包裝的最小尺寸不得小于l0mm。（二）運送1送檢的標本，要求嚴密包裝，外表加以消毒。編26、號、登記后，貼上“生物危險標識”標簽，嚴防漏脫和遺失。2認真填寫標本送檢單，由專人、專車，盡快送到指定的檢驗部門或單位，完成交接，索要回執。3妥善保存，運送途中要避免日光和高熱，利用一切條件防止病原微生物死亡。4標本至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，48h內能進行接種的可置于4保存，如未能接種應置70或以下保存。（三）標本的接收1各省級中心實驗室應公布標本接收聯系方式，并實行24h標本接收制。2國家實驗室標本接收需送國家指定中心實驗室檢測的原始標本、病毒分離物、可疑陽性標本、血清等，填寫標本送檢登記表，在低溫保存條件下，于24h內送至指定中心進行復核。3接收實驗室應有接收標本記錄，時間、接收人及完整的標本信息登記。并向送達人開具回執。撰寫人批準人生效日期邢姚黃志斌2013年1月28日